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游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒操作步驟及要求
  • 發(fā)布日期:2020-10-14      瀏覽次數(shù):1556
    • 游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒樣本處理及要求:

      1. 血清:室溫血液自然凝固10-20 分鐘,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

      2. 血漿:選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

      3. 尿液:用無菌管收集,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

      4. 細胞:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

      5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

      6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

      7. 不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

      游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒操作步驟:

      1.標(biāo)準品的加樣:設(shè)置標(biāo)準品孔和樣本孔,標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL

      2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

      3.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。

      4.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

      5.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

      6.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

      7.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

      8.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

      9.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 

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