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分享細(xì)菌轉(zhuǎn)化操作步驟
  • 發(fā)布日期:2021-05-17      瀏覽次數(shù):11146
    • 細(xì)菌轉(zhuǎn)化操作步驟:

      1、事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。

      2、從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管(100μl)感受態(tài)菌,立即用手指加溫融化后插入冰上,冰浴5~10min。

      3、 加入5μl連接好的質(zhì)粒混合液(DNA含量不超過100ng),輕輕震蕩后放置冰上20min。

      4、 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進(jìn)行熱休克,然后迅速放回冰中,靜置3~5min。

      5、 在超凈工作臺(tái)中向上述各管中分別加入500μl LB培養(yǎng)基(不含抗菌素)輕輕混勻,然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.

      6、 在超凈工作臺(tái)中取上述轉(zhuǎn)化混合液100~300μl,分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻(注意:玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,待其冷卻后再涂)。

      7、 如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話,滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal,8μl 20% IPTG,用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。

      8、 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記,先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后,再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜。

      9、 在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,擦干桌面,寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

      10、觀察平板上長(zhǎng)出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。

       

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